O desenvolvimento e produção de biofármacos, como os anticorpos monoclonais, está em ascensão nos últimos anos. Atualmente, mais de vinte anticorpos monoclonais foram aprovados para utilização no tratamento de doenças autoimunes, cardiovasculares, doenças infecciosas e até mesmo neoplasias.

A caracterização dessas biomoléculas se faz imprescindível para a obtenção de dados de pesquisa e aprovação regulatória para a produção desses novos fármacos. Em termos de equipamentos, a técnica de cromatografia de alta eficiência é frequentemente empregada para estabelecer métodos robustos e reprodutíveis para análises terapêuticas, nos quais os modos de separação mais utilizados para a identificação/quantificação de proteínas nativas são a exclusão por tamanho (SEC) e troca iônica (IEC) em fase reversa ou interação hidrofílica (HILIC). Já em termos de detecção, normalmente a detecção por UV, fluorescência ou espalhamento de luz são as mais utilizadas e, quando necessário informações mais detalhadas, emprega-se a espectrometria de massas.

O processo de agregação de proteínas é um dos principais problemas quando se fala em produção de biofármacos, levando à perda efetiva de sua atividade terapêutica. Dessa forma, a formação de agregados necessita ser caracterizada e controlada ao longo do desenvolvimento desses medicamentos, haja vista que é um processo favorecido quando se tem variações de pH, temperatura, força iônica e concentração. Neste caso, a técnica mais aceita e utilizada para análise de agregados de proteínas para fins regulatórios é a cromatografia por exclusão de tamanho (SEC).

Já quando se deseja analisar variantes com carga ou proteínas ligadas covalentemente ou não a polímeros do tipo PEG, a cromatografia por troca iônica é a melhor escolha. A nova tecnologia de colunas relacionadas a este modo de separação aumenta o rendimento no controle de qualidade de biofármacos. O tipo de grupamento ligado (amônio quaternário, carboximetil ou sulfopropil) aliado ao tamanho de partícula e dimensões corretas são parâmetros que otimizam a separação quando se deseja alta eficiência ou alto rendimento.

Por fim, a caracterização de anticorpos glicosilados é outro parâmetro importante para assegurar a qualidade desses biofármacos. O processo de glicosilação pode influenciar na imunogenicidade, farmacocinética e farmacodinâmicas dessas moléculas. O método padrão empregado para a análise de glicanos é a cromatografia por interação hidrofílica (HILIC) com detecção por fluorescência. Esta técnica é capaz de separar estruturas com a mesma composição na base da sequência ou ligação, bem como frações carregadas ou neutras de glicanos na mesma corrida analítica.

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Referências:

• Nota de aplicação TOSOH Bioscience, Characterizing biotherapeutics with HPLC smart solutions for large molecules.