As colunas BioPro HIC são colunas de HPLC cujo leito é constituído de partículas rígidas (de poros) funcionalizadas com grupos butílicos. O objetivo da técnica é explorar a interação de natureza hidrofóbica entre os analitos de interesse (proteínas) e a fase estacionária através de gradientes salinos. A técnica se faz particularmente interessante devido à preservação da estrutura da proteína em seu estado nativo e à agilidade das corridas devido principalmente à natureza da fase estacionária.

A técnica tem como base a utilização de fases móveis altamente carregadas com sais como o sulfato de amônio, cuja característica permite a exposição de sítios hidrofóbicos na estrutura de uma proteína. A extinção do sal responsável por este efeito torna os mesmos sítios cada vez mais blindados e reduz a afinidade entre o analito e a fase estacionária, consequentemente favorecendo a eluição das proteínas em estudo.

Algumas das principais sugestões para o trabalho com este tipo de técnica são:

• Alteração da concentração de sais na fase móvel: A alteração da quantidade de sal envolvido no gradiente altera a relação entre as proteínas e a fase estacionária. O seu aumento de concentração se traduz no aumento de retenção;
• Alteração de gradientes: a suavização de um gradiente leva a alterações de hidrofobicidade mais brandas, o que não apenas favorece maior retenção como melhor separação de analitos de interesse;
• Alterações de temperatura: Alterações de temperatura são bem vindas, neste caso o seu aumento leva à um aumento de retenção por conta de alterações discretas da estrutura da proteína (Cuidado! O aumento demasiado de temperatura pode levar à perda de enovelamento da proteína).

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