A pele, o maior órgão do corpo humano, tem como função primordial proteger o organismo contra agentes externos. Sua camada mais superficial, o estrato córneo, é responsável por prevenir a perda excessiva de água e contribuir para a manutenção do equilíbrio hídrico da pele. Essas funções são viabilizadas pela presença do Fator Natural de Hidratação (NMF), que é composto por aminoácidos livres e seus derivados, como o ácido pirrolidona-5-carboxílico (PCA), o ácido urocânico (UCA) e a histidina (His) (Figura 1), além de outras substâncias. Pesquisas indicam que a diminuição dos níveis de NMF está frequentemente associada a condições como pele seca, escamosa, psoríase e dermatites, o que torna fundamental o desenvolvimento de métodos precisos para quantificar esses biomarcadores e avaliar a saúde da pele.

Figura 1: Estrutura química da PCA, UCA e His

No post de hoje, apresentamos um estudo conduzido por pesquisadores da Faculdade de Ciências Farmacêuticas da USP, cujo objetivo foi desenvolver um protocolo otimizado para a quantificação dos biomarcadores PCA, UCA e His no estrato córneo. Vinte e quatro participantes (7 homens e 17 mulheres) com idades entre 19 e 58 anos foram recrutados para a pesquisa, todos sem histórico de distúrbios dermatológicos ou alergias. Para a extração dos biomarcadores, foi utilizada a técnica de tape-stripping, que remove o estrato córneo de maneira não invasiva, preservando a integridade da pele e permitindo a coleta das substâncias para análise. A quantificação precisa dos biomarcadores foi realizada por cromatografia líquida de alta performance com detector de arranjo de fotodiodos (HPLC-PDA). As detecções foram feitas nos comprimentos de onda de 268 nm para a identificação de PCA e His, e de 210 nm para a identificação de UCA.

As amostras das fitas de tape-stripping foram analisadas utilizando a coluna cromatográfica YMC-Triart C18, com um método de eluição em gradiente, composto por uma fase móvel de fosfato de trietilamônio e acetonitrila. As Figuras 2A e 3A mostram os cromatogramas da fita tape-stripping isolada (controle), utilizada para identificar possíveis interferências. Em seguida, as fitas extraídas foram fortificadas com padrões de referência de PCA, UCA e His nas concentrações variando de 0,2 a 10 μg/mL e submetidas à análise cromatográfica (Figuras 2B e 3B). Por fim, as fitas dos participantes foram analisadas, e os cromatogramas representativos dessas amostras estão nas Figuras 2C e 3C. Nos resultados obtidos, os picos correspondentes aos marcadores dérmicos foram facilmente diferenciados dos picos interferentes, graças aos diferentes tempos de retenção. Assim, o método apresentou uma especificidade satisfatória.

Figura 2: Cromatograma com detecção em 268 nm

Figura 3: Cromatograma com detecção em 210 nm

A técnica HPLC-PDA mostrou-se seletiva, linear (na faixa de 0,2 a 5,0 μg/mL), precisa (com recuperação entre 92,7% e 115,1%) e exata, com limites adequados de detecção e quantificação. A precisão foi confirmada por valores de desvio padrão relativo (RSD) entre 0,3% e 12,1%, e a incerteza da medição foi avaliada, apresentando valores de incerteza combinada de 0,025–0,12 μg/mL para His, 0,004–0,28 μg/mL para PCA e 0,016–0,16 μg/mL para UCA. Estes resultados demonstraram que a coluna YMC-Triart C18 foi eficiente na separação dos biomarcadores PCA, UCA e His, permitindo uma quantificação precisa e confiável dos compostos no estrato córneo.

Convidamos você a conferir o estudo completo, disponível para download clicando aqui: