Plasmídeos são pequenos DNA circulares de fita dupla que têm sido vastamente estudado pela biotecnologia, uma vez que pode ser empregado como ferramenta em terapias gênicas e na fabricação de vacinas.^1,2

Os plasmídeos podem ser encontrados nas formas superenrolada, circular e linear. A primeira, cuja conformação é a desejada, apresenta alta estabilidade e antigenicidade favorável, enquanto as duas últimas são resultados de alterações conformacionais que ocorrem durante o bioprocesso. Estas isoformas são consideradas impurezas uma vez que afetam a eficiência e a segurança dos produtos. ^1,2

Mediante isso, guias do FDA recomendam que um produto a base de plasmídeos tenha pureza acima de 80%, e para garantir a qualidade e pureza destas substâncias, a indústria considera como seguro uma pureza superior a 90%. Dessa forma, a quantificação da abundância relativa das isoformas de plasmídeos é uma etapa crítica de todo o processo (fabricação do lote, formulação e armazenamento).³

A utilização de cromatografia de troca aniônica para a separação de plasmídeos de DNA é considerada, atualmente, uma excelente opção. Esta técnica se baseia nas diferenças de quantidade e localização de cargas na superfície da biomolécula, além de ser uma técnica robusta, reprodutível, facilmente automatizada e que requer pequenas quantidades de amostras.

A Verde Analítica, em parceria com a YMC, apresenta uma metodologia para a separação e quantificação das três isoformas do plasmídeo de DNA (superenrolada, circular aberta e linear) através da utilização da coluna YMC BioPro HIC BF. As colunas BioPro HIC apresentam uma alta hidrofobicidade quando comparada a outras colunas HIC presentes no mercado, o que lhes conferem maior capacidade de purificar proteínas, como anticorpos, sem desnaturar e proteínas de baixa hidrofobicidade, além de apresentarem excelentes formatos de picos mesmo em altas condições de carga de amostra.

Figura 1. Cromatogramas do plasmídeo de DNA e suas isoformas utilizando a coluna BioPro HIC BF.

Mais informações:

Referência:

• Abdulrahman, A.; Ghanem, A. Recent Advances in Chromatographic Purification of Plasmid DNA for Gene Therapy and DNA Vaccines: A Review. Analytica Chimica Acta. 2018, 1025, 41–57.
• Hitchcock, A. G.; Sergeant, J. A.; Rahman, S. F.; Tharia, H. A.; Blom, H. Scale-Up of a Plasmid DNA Purification Process. BioProcess International. 2010, 8(11), 46–54.
• CBER, Guidance for Industry: Considerations for Plasmid DNA Vaccines for Infectious Disease Modifications. US Food and Drug Administration, November 2007.