Os conjugados peptídeo-oligonucleotídeo (POCs) estão revolucionando o desenvolvimento de terapias avançadas. Ao unir as propriedades dos peptídeos permeáveis à membrana com a ação terapêutica de oligonucleotídeos, esses conjugados superam uma das maiores barreiras no tratamento molecular: a dificuldade dos oligonucleotídeos em atravessar a membrana celular. Essa inovação amplia a entrega intracelular, potencializando a eficácia de terapias para doenças complexas.

No entanto, garantir a pureza dos POCs é essencial. Impurezas resultantes de conjugação incompleta podem comprometer a eficiência do tratamento. Por isso, análises cromatográficas altamente sensíveis e seletivas são fundamentais para o controle de qualidade desses compostos inovadores.

E é aqui que entra a solução da YMC: a coluna YMC Accura Triart Bio C18, desenvolvida para oferecer alta resolução e performance superior na análise de POCs e outros bioconjugados complexos.

Por que a YMC Accura Triart Bio C18 faz a diferença

Projetada para análises desafiadoras, a coluna combina:

• Partículas de 1,9 µm e poros de 30 nm: ideais para separar moléculas grandes, como conjugados peptídeo-oligonucleotídeo, com picos bem definidos e simétricos.
• Superfície tratada com tecnologia Accura: reduz as interações indesejadas entre os analitos e a superfície da coluna, minimizando o carry over, que é a contaminação residual que pode ocorrer em análises consecutivas, e assegurando alta reprodutibilidade entre as corridas cromatográficas.
• Resistência térmica: permite análises a temperaturas elevadas (até 80 °C), melhorando a eficiência e a nitidez dos picos.

Com essa configuração, a coluna possibilita separação completa entre o POC, o oligonucleotídeo livre e o peptídeo não conjugado, garantindo resultados confiáveis mesmo para impurezas em níveis traço.

No post de hoje, a Verde Analítica apresenta o resultado da otimização de parâmetros cromatográficos, incluindo agentes de emparelhamento iônico, gradientes, pH e temperatura da coluna, para obter alta resolução e sensibilidade na caracterização precisa dos POCs. É detalhado como o acetato de butilamônio (BAA) e uma coluna YMC Accura Triart Bio C18 se mostraram ideais para separar eficazmente o POC de suas impurezas.

O papel do acetato de butilamônio (BAA) na análise

Para obter alta resolução e picos bem definidos, a escolha do agente de emparelhamento iônico é fundamental. O BAA atua formando pares iônicos com os grupos carregados negativamente dos oligonucleotídeos, reduzindo sua polaridade e aumentando a retenção na fase reversa da coluna.

Essa interação melhora a seletividade e garante uma separação eficiente entre o POC e suas impurezas, mesmo quando as diferenças estruturais são muito pequenas. Além disso, o BAA proporciona picos mais simétricos e melhor sensibilidade, contribuindo para uma análise mais confiável e reprodutível.

O objetivo desta análise foi assegurar um controle de qualidade preciso e confiável, fundamental para a eficácia terapêutica dos conjugados, já que a conjugação incompleta pode comprometer significativamente a entrega celular. Com o uso da coluna YMC Accura Triart Bio C18, o método otimizado demonstrou desempenho excepcional, separando com clareza o oligonucleotídeo modificado, o não modificado e o POC bruto em picos bem definidos, comprovando sua alta resolução e a robustez analítica da solução.

Para conferir todas as etapas do desenvolvimento analítico, baixe a nota de aplicação completa no botão abaixo:

Referências:

NAGANUMA, Miyako et al. High-Resolution HPLC for Separating Peptide−Oligonucleotide Conjugates. ACS Omega, v. 10, n. 20, p. 20578-20584, 2025.